Chromatographie

La chromatographie sur couche mince est utilisée pour séparer les composants d'un extrait végétal, illustrant l'expérience avec des pigments végétaux qui a donné son nom à la chromatographie.

En analyse chimique , la chromatographie est une technique de laboratoire permettant de séparer un mélange en ses composants. Le mélange est dissous dans un solvant fluide (gaz ou liquide) appelé phase mobile , qui le transporte à travers un système (une colonne, un tube capillaire, une plaque ou une feuille) sur lequel est fixé un matériau appelé phase stationnaire . Étant donné que les différents constituants du mélange ont tendance à avoir des affinités différentes pour la phase stationnaire et sont retenus pendant des durées différentes en fonction de leurs interactions avec ses sites de surface, les constituants se déplacent à des vitesses apparentes différentes dans le fluide mobile, provoquant leur séparation. La séparation est basée sur le partage différentiel entre les phases mobiles et stationnaires. Des différences subtiles dans le coefficient de partage d'un composé entraînent une rétention différentielle sur la phase stationnaire et affectent ainsi la séparation. [1]

La chromatographie peut être préparative ou analytique . Le but de la chromatographie préparative est de séparer les composants d'un mélange pour une utilisation ultérieure et constitue donc une forme de purification . [2] [3] Ce processus est associé à des coûts plus élevés en raison de son mode de production. [4] [5] La chromatographie analytique est effectuée normalement avec de plus petites quantités de matière et sert à établir la présence ou à mesurer les proportions relatives d'analytes dans un mélange. Les deux types ne s’excluent pas mutuellement. [6]

Étymologie et prononciation

La chromatographie, prononcée / ˌ k r m ə ˈ t ɒ ɡ r ə f i / , est dérivée du grec χρῶμα chroma , qui signifie « couleur », et γράφειν graphein , qui signifie « écrire ». La combinaison de ces deux termes est directement héritée de l’invention de la première technique utilisée pour séparer les pigments. [7]

Histoire

La chromatographie a été conçue pour la première fois à l' Université de Kazan par le scientifique russe d'origine italienne Mikhaïl Tsvet en 1900. [8] [9] Il a développé la technique et a inventé le terme chromatographie dans la première décennie du 20e siècle, principalement pour la séparation des pigments végétaux tels que la chlorophylle , les carotènes et les xanthophylles . Puisque ces composants se séparent en bandes de couleurs différentes (respectivement vert, orange et jaune), ils ont directement inspiré le nom de la technique. De nouveaux types de chromatographie développés au cours des années 1930 et 1940 ont rendu cette technique utile pour de nombreux processus de séparation . [dix]

La technique de chromatographie s'est considérablement développée grâce aux travaux de l'Archer John Porter Martin et de Richard Laurence Millington Synge au cours des années 1940 et 1950, pour lesquels ils ont remporté le prix Nobel de chimie en 1952 . [11] Ils ont établi les principes et les techniques de base de la chromatographie de partage, et leurs travaux ont encouragé le développement rapide de plusieurs méthodes chromatographiques : la chromatographie sur papier , la chromatographie en phase gazeuse et ce qui deviendra la chromatographie liquide à haute performance . Depuis, la technologie a progressé rapidement. Les chercheurs ont découvert que les principes fondamentaux de la chromatographie de Tsvet pouvaient être appliqués de nombreuses manières différentes, ce qui a donné naissance aux différentes variétés de chromatographie décrites ci-dessous. Les progrès améliorent continuellement les performances techniques de la chromatographie, permettant la séparation de molécules de plus en plus similaires.

Termes

  • Analyte – la substance à séparer pendant la chromatographie. C'est aussi normalement ce qu'il faut du mélange.
  • Chromatographie analytique – utilisation de la chromatographie pour déterminer l'existence et éventuellement la concentration d'un ou plusieurs analytes dans un échantillon .
  • Phase liée – une phase stationnaire liée de manière covalente aux particules de support ou à la paroi intérieure du tube de la colonne.
  • Chromatogramme – le résultat visuel du chromatographe. Dans le cas d'une séparation optimale, différents pics ou motifs sur le chromatogramme correspondent à différents composants du mélange séparé.
    Chromatogramme avec pics non résolus Chromatogramme avec deux pics résolus
    Sur l'axe des x est tracé le temps de rétention et sur l'axe des y un signal (par exemple obtenu par un spectrophotomètre , un spectromètre de masse ou divers autres détecteurs) correspondant à la réponse créée par les analytes sortant du système. Dans le cas d'un système optimal, le signal est proportionnel à la concentration de l'analyte spécifique séparé.
  • Chromatographe – un instrument qui permet une séparation sophistiquée, par exemple une séparation par chromatographie en phase gazeuse ou par chromatographie liquide.
  • Chromatographie – méthode physique de séparation qui répartit les composants à séparer entre deux phases, l'une stationnaire (phase stationnaire), l'autre (phase mobile) se déplaçant dans une direction définie.
  • Éluant (parfois orthographié éluant ) – le solvant ou le fixateur de solvant utilisé en chromatographie d'élution et est synonyme de phase mobile . [12]
  • Éluat – le mélange de soluté (voir Éluite) et de solvant (voir Éluant) sortant de la colonne. [12]
  • Effluent – ​​le flux sortant d'une colonne chromatographique. En pratique, il est utilisé comme synonyme d' éluat , mais le terme fait plus précisément référence au flux indépendant de la séparation en cours. [12]
  • Eluite – un terme plus précis pour soluté ou analyte . Il s’agit d’un composant échantillon sortant de la colonne chromatographique. [12]
  • Série éluotropique – une liste de solvants classés en fonction de leur pouvoir éluant.
  • Phase immobilisée – une phase stationnaire qui est immobilisée sur les particules de support ou sur la paroi interne du tube de la colonne.
  • Phase mobile – la phase qui se déplace dans une direction définie. Il peut s'agir d'un liquide (LC et électrochromatographie capillaire , CEC), d'un gaz (GC) ou d'un fluide supercritique (chromatographie en fluide supercritique, SFC). La phase mobile comprend l'échantillon séparé/analysé et le solvant qui déplace l'échantillon à travers la colonne. Dans le cas de la HPLC, la phase mobile est constituée d'un ou plusieurs solvants non polaires tels que l'hexane en phase normale ou d'un solvant polaire tel que le méthanol en chromatographie en phase inverse et l'échantillon est séparé. La phase mobile se déplace dans la colonne de chromatographie (la phase stationnaire) où l'échantillon interagit avec la phase stationnaire et est séparé.
  • Chromatographie préparative – utilisation de la chromatographie pour purifier des quantités suffisantes d'une substance en vue d'une utilisation ultérieure, plutôt que d'une analyse.
  • Temps de rétention – temps caractéristique nécessaire à un analyte particulier pour traverser le système (de l'entrée de la colonne au détecteur) dans des conditions définies. Voir aussi : Indice de rétention de Kovats
  • Échantillon – la matière analysée en chromatographie. Il peut s’agir d’un seul composant ou d’un mélange de composants. Lorsque l'échantillon est traité au cours d'une analyse, la ou les phases contenant les analytes d'intérêt sont appelés échantillon alors que tout ce qui est séparé par intérêt de l'échantillon avant ou au cours de l'analyse est appelé comme déchet.
  • Soluté – les composants de l’échantillon en chromatographie de partage.
  • Solvant – toute substance capable de solubiliser une autre substance, et notamment la phase liquide mobile en chromatographie liquide.
  • Phase stationnaire – la substance fixée en place pour la procédure de chromatographie. Les exemples incluent la couche de silice en chromatographie sur couche mince
  • Détecteur – l'instrument utilisé pour la détection qualitative et quantitative des analytes après séparation.

La chromatographie est basée sur la notion de coefficient de partage. Tout soluté se partage entre deux solvants non miscibles. Lorsque nous rendons un solvant immobile (par adsorption sur une matrice de support solide) et un autre mobile, cela aboutit aux applications les plus courantes de la chromatographie. Si le support matriciel, ou phase stationnaire, est polaire (par exemple papier, silice, etc.), il s'agit d'une chromatographie en phase directe, et s'il est non polaire (C-18), il s'agit d'une chromatographie en phase inverse.

Techniques par forme de lit chromatographique

Chromatographie sur colonne

La chromatographie sur colonne est une technique de séparation dans laquelle le lit stationnaire se trouve à l'intérieur d'un tube. Les particules de la phase stationnaire solide ou le support enrobé d'une phase stationnaire liquide peuvent remplir tout le volume intérieur du tube (colonne garnie) ou être concentrées sur ou le long de la paroi intérieure du tube laissant un chemin ouvert et sans restriction pour la phase mobile dans la partie médiane du tube (colonne tubulaire ouverte). Les différences de vitesse de déplacement à travers le milieu sont calculées en fonction des différents temps de rétention de l'échantillon. [13] [14] En 1978, W. Clark Still a introduit une version modifiée de la chromatographie sur colonne appelée chromatographie sur colonne flash (flash). [15] [16] La technique est très similaire à la chromatographie sur colonne traditionnelle, sauf que le solvant est entraîné à travers la colonne en appliquant une pression positive. Cela a permis d'effectuer la plupart des séparations en moins de 20 minutes, avec des séparations améliorées par rapport à l'ancienne méthode. Les systèmes de chromatographie flash modernes sont vendus sous forme de cartouches en plastique préemballées et le solvant est pompé à travers la cartouche. Les systèmes peuvent également être liés à des détecteurs et des collecteurs de fractions assurant l'automatisation. L'introduction de pompes à gradient a entraîné des séparations plus rapides et une consommation moindre de solvants.

Dans l'adsorption en lit expansé , un lit fluidisé est utilisé, plutôt qu'une phase solide constituée d'un lit garni. Cela permet d'omettre les étapes de clarification initiales telles que la centrifugation et la filtration, pour les bouillons de culture ou les bouillies de cellules brisées.

La chromatographie sur la phosphocellulose utilise l'affinité de liaison de nombreuses protéines liant l'ADN à la phosphocellulose. Plus l'interaction d'une protéine avec l'ADN est forte, plus la concentration en sel nécessaire pour éluer cette protéine est élevée. [17]

Chromatographie planaire

La chromatographie planaire est une technique de séparation dans laquelle la phase stationnaire est présente sous forme ou sur un plan. Le plan peut être un papier, servant tel quel ou imprégné d'une substance comme le lit fixe ( chromatographie sur papier ) ou une couche de particules solides étalées sur un support tel qu'une plaque de verre ( chromatographie sur couche mince ). Différents composés du mélange échantillon parcourent des distances différentes en fonction de la force avec laquelle ils interagissent avec la phase stationnaire par rapport à la phase mobile. Le facteur de rétention spécifique (R f ) de chaque produit chimique peut être utilisé pour faciliter l'identification d'une substance inconnue.

Chromatographie sur papier

Chromatographie sur papier en cours
Chromatographie sur papier

La chromatographie sur papier est une technique qui consiste à placer un petit point ou une ligne de solution échantillon sur une bande de papier de chromatographie . Le papier est placé dans un récipient recouvert d'une fine couche de solvant et scellé. À mesure que le solvant monte à travers le papier, il rencontre le mélange échantillon, qui commence à remonter le papier avec le solvant. Ce papier est constitué de cellulose , une substance polaire , et les composés contenus dans le mélange voyagent plus loin s'ils sont moins polaires. Les substances plus polaires se lient plus rapidement au papier de cellulose et voyagent donc moins loin.

Chromatographie sur couche mince (CCM)

Chromatographie sur couche mince

La chromatographie sur couche mince (CCM) est une technique de laboratoire largement utilisée pour séparer différents produits biochimiques sur la base de leurs attractions relatives pour les phases stationnaires et mobiles. C'est similaire à la chromatographie sur papier . Cependant, au lieu d'utiliser une phase stationnaire de papier, cela implique une phase stationnaire d'une fine couche d' adsorbant comme le gel de silice , l'alumine ou la cellulose sur un substrat plat et inerte . TLC est très polyvalent ; plusieurs échantillons peuvent être séparés simultanément sur la même couche, ce qui le rend très utile pour les applications de dépistage telles que le test des niveaux de médicaments et de la pureté de l'eau. [18]

La possibilité de contamination croisée est faible puisque chaque séparation est effectuée sur une nouvelle couche. Par rapport au papier, il présente l’avantage de tirages plus rapides, de meilleures séparations, d’une meilleure analyse quantitative et du choix entre différents adsorbants. Pour une résolution encore meilleure et une séparation plus rapide utilisant moins de solvant, une CCM haute performance peut être utilisée. Une utilisation populaire plus ancienne consistait à différencier les chromosomes en observant la distance dans le gel (la séparation était une étape distincte).

Chromatographie par déplacement

Le principe de base de la chromatographie par déplacement est le suivant : une molécule ayant une forte affinité pour la matrice de chromatographie (le déplaceur) entre en compétition efficacement pour les sites de liaison et déplace ainsi toutes les molécules ayant des affinités moindres. [19] Il existe des différences distinctes entre la chromatographie de déplacement et d'élution. En mode élution, les substances émergent généralement d’une colonne sous forme de pics gaussiens étroits. Une large séparation des pics, de préférence par rapport à la ligne de base, est souhaitée pour une purification maximale. La vitesse à laquelle tout composant d'un mélange descend dans la colonne en mode élution dépend de nombreux facteurs. Mais pour que deux substances se déplacent à des vitesses différentes et soient ainsi résolues, il doit exister des différences substantielles dans certaines interactions entre les biomolécules et la matrice chromatographique. Les paramètres de fonctionnement sont ajustés pour maximiser l’effet de cette différence. Dans de nombreux cas, la séparation de base des pics ne peut être obtenue qu’avec une élution par gradient et de faibles charges de colonne. Ainsi, deux inconvénients de la chromatographie en mode élution, en particulier à l’échelle préparative, sont la complexité opérationnelle, due au pompage du solvant par gradient, et le faible débit, dû aux faibles charges de colonne. La chromatographie par déplacement présente des avantages par rapport à la chromatographie d'élution dans la mesure où les composants sont résolus en zones consécutives de substances pures plutôt qu'en « pics ». Étant donné que le procédé tire parti de la non-linéarité des isothermes, une charge de colonne plus importante peut être séparée sur une colonne donnée, les composants purifiés étant récupérés à des concentrations nettement plus élevées.

Techniques par état physique de la phase mobile

Chromatographie des gaz

La chromatographie en phase gazeuse (GC), également parfois appelée chromatographie gaz-liquide (GLC), est une technique de séparation dans laquelle la phase mobile est un gaz. La séparation par chromatographie en phase gazeuse est toujours réalisée dans une colonne, généralement « à garnissage » ou « capillaire ». Les colonnes remplies sont les chevaux de bataille de routine de la chromatographie en phase gazeuse, étant moins chères et plus faciles à utiliser et offrant souvent des performances adéquates. Les colonnes capillaires donnent généralement une résolution bien supérieure et, bien que plus coûteuses, elles sont de plus en plus utilisées, en particulier pour les mélanges complexes. De plus, les colonnes capillaires peuvent être divisées en trois classes : les colonnes tubulaires ouvertes à couche poreuse (PLOT), les colonnes tubulaires ouvertes à revêtement mural (WCOT) et les colonnes tubulaires ouvertes à revêtement de support (SCOT). Les colonnes PLOT sont uniques dans le sens où la phase stationnaire est adsorbée sur les parois de la colonne, tandis que les colonnes WCOT ont une phase stationnaire qui est chimiquement liée aux parois. Les colonnes SCOT sont en quelque sorte la combinaison des deux types mentionnés dans le sens où elles ont des particules de support collées aux parois de la colonne, mais ces particules ont une phase liquide chimiquement liée sur elles. [20] Les deux types de colonnes sont fabriqués à partir de matériaux non adsorbants et chimiquement inertes. L'acier inoxydable et le verre sont les matériaux habituels pour les colonnes à garnissage et le quartz ou la silice fondue pour les colonnes capillaires.

La chromatographie en phase gazeuse est basée sur un équilibre de partage de l'analyte entre une phase stationnaire liquide solide ou visqueuse (souvent un matériau liquide à base de silicone) et un gaz mobile (le plus souvent de l'hélium). La phase stationnaire adhère à l'intérieur d'un tube en verre ou en silice fondue de petit diamètre (généralement 0,53 à 0,18 mm de diamètre intérieur) (une colonne capillaire) ou à une matrice solide à l'intérieur d'un tube métallique plus grand (une colonne remplie). Il est largement utilisé en chimie analytique ; bien que les températures élevées utilisées en GC le rendent inadapté aux biopolymères ou aux protéines de haut poids moléculaire (la chaleur les dénature), fréquemment rencontrés en biochimie , il est bien adapté à une utilisation dans les domaines de la pétrochimie , de la surveillance et de l'assainissement de l'environnement et de la chimie industrielle . Il est également largement utilisé dans la recherche en chimie.

Chromatographie liquide

Appareil HPLC préparatif

La chromatographie liquide (LC) est une technique de séparation dans laquelle la phase mobile est un liquide. Elle peut être réalisée soit en colonne, soit en plan. La chromatographie liquide actuelle, qui utilise généralement de très petites particules de garnissage et une pression relativement élevée, est appelée chromatographie liquide haute performance .

En HPLC, l'échantillon est forcé par un liquide à haute pression (la phase mobile) à travers une colonne remplie d'une phase stationnaire composée de particules de forme irrégulière ou sphérique, d'une couche monolithique poreuse ou d'une membrane poreuse. Les monolithes sont des « supports chromatographiques semblables à des éponges » [21] et sont constitués d'un bloc infini de parties organiques ou inorganiques. La HPLC est historiquement divisée en deux sous-classes différentes en fonction de la polarité des phases mobile et stationnaire. Les méthodes dans lesquelles la phase stationnaire est plus polaire que la phase mobile (par exemple, le toluène comme phase mobile, la silice comme phase stationnaire) sont appelées chromatographie liquide en phase normale (NPLC) et l'inverse (par exemple, le mélange eau-méthanol comme phase mobile). et C18 (octadécylsilyle) comme phase stationnaire) est appelée chromatographie liquide en phase inversée (RPLC).

Chromatographie en fluide supercritique

La chromatographie en fluide supercritique est une technique de séparation dans laquelle la phase mobile est un fluide situé au-dessus et relativement proche de sa température et de sa pression critiques.

Les techniques spécifiques sous cette rubrique générale sont répertoriées ci-dessous.

Chromatographie d'affinité

La chromatographie d'affinité [22] est basée sur une interaction sélective non covalente entre un analyte et des molécules spécifiques. C'est très spécifique, mais pas très robuste. [23] Il est souvent utilisé en biochimie dans la purification des protéines liées aux étiquettes. Ces protéines de fusion sont marquées avec des composés tels que des His-tags , de la biotine ou des antigènes , qui se lient spécifiquement à la phase stationnaire. Après purification, ces étiquettes sont généralement retirées et la protéine pure est obtenue.

La chromatographie d'affinité utilise souvent l'affinité d'une biomolécule pour un métal (Zn, Cu, Fe, etc.). Les colonnes sont souvent préparées manuellement et peuvent être conçues spécifiquement pour les protéines d’intérêt. Les colonnes d'affinité traditionnelles sont utilisées comme étape préparatoire pour éliminer les biomolécules indésirables, ou comme étape primaire dans l'analyse d'une protéine aux propriétés physiques inconnues. [24]

Cependant, il existe des techniques de chromatographie liquide qui utilisent les propriétés de la chromatographie d'affinité. La chromatographie d'affinité avec métal immobilisé (IMAC) [25] [26] est utile pour séparer les molécules susmentionnées en fonction de l'affinité relative pour le métal. Souvent, ces colonnes peuvent être chargées de différents métaux pour créer une colonne ayant une affinité ciblée. [27]

Techniques par mécanisme de séparation

Chromatographie d'échange d'ions

La chromatographie échangeuse d'ions (généralement appelée chromatographie ionique) utilise un mécanisme d'échange d'ions pour séparer les analytes en fonction de leurs charges respectives. Elle est généralement réalisée en colonnes mais peut également être utile en mode planaire. La chromatographie par échange d'ions utilise une phase stationnaire chargée pour séparer les composés chargés, notamment les anions , les cations , les acides aminés , les peptides et les protéines . Dans les méthodes conventionnelles, la phase stationnaire est une résine échangeuse d'ions qui porte des groupes fonctionnels chargés qui interagissent avec des groupes de charges opposées du composé à retenir. Il existe deux types de chromatographie échangeuse d'ions : échangeuse de cations et échangeuse d'anions. Dans la chromatographie échangeuse de cations, la phase stationnaire a une charge négative et l'ion échangeable est un cation, tandis que dans la chromatographie échangeuse d'anions, la phase stationnaire a une charge positive et l'ion échangeable est un anion. [28] La chromatographie par échange d'ions est couramment utilisée pour purifier les protéines par FPLC .

Chromatographie d'exclusion de taille

La chromatographie d'exclusion de taille (SEC) est également connue sous le nom de chromatographie par perméation de gel (GPC) ou chromatographie par filtration sur gel et sépare les molécules en fonction de leur taille (ou plus précisément en fonction de leur diamètre hydrodynamique ou de leur volume hydrodynamique). Les molécules plus petites peuvent pénétrer dans les pores du milieu et, par conséquent, les molécules sont piégées et éliminées du flux de phase mobile. Le temps de séjour moyen dans les pores dépend de la taille effective des molécules d'analyte. Cependant, les molécules qui sont plus grandes que la taille moyenne des pores du garnissage sont exclues et ne subissent donc pratiquement aucune rétention ; ces espèces sont les premières à être éluées. Il s'agit généralement d'une technique de chromatographie à basse résolution et elle est donc souvent réservée à l'étape finale de « polissage » d'une purification. Elle est également utile pour déterminer la structure tertiaire et la structure quaternaire des protéines purifiées, d’autant plus qu’elle peut être réalisée dans des conditions de solution native.

Séparation chromatographique par adsorption sur lit expansé

Une colonne d'adsorption chromatographique en lit expansé (EBA) pour un processus de séparation biochimique comprend un distributeur de liquide d'égalisation de pression ayant une fonction d'auto-nettoyage au-dessous d'une plaque de tamis de blocage poreuse au fond du lit expansé, un ensemble buse de partie supérieure ayant une fonction de nettoyage par rétro-rinçage. au sommet du lit expansé, une meilleure répartition de la liqueur de base ajoutée dans le lit expansé garantit que le fluide passé à travers la couche de lit expansé présente un état d'écoulement de piston. La couche de lit expansée affiche un état d'écoulement de piston. La colonne de séparation chromatographique en lit expansé présente l'avantage d'augmenter l'efficacité de séparation du lit expansé.

La chromatographie par adsorption sur lit expansé (EBA) est une technique pratique et efficace pour la capture de protéines directement à partir d'un échantillon brut non clarifié. Dans la chromatographie EBA, le lit décanté est d'abord dilaté par un flux ascendant de tampon d'équilibrage. La charge brute, un mélange de protéines solubles, de contaminants, de cellules et de débris cellulaires, est ensuite acheminée vers le haut à travers le lit expansé. Les protéines cibles sont capturées sur l'adsorbant, tandis que les particules et les contaminants les traversent. Un changement de tampon d’élution tout en maintenant un flux ascendant entraîne une désorption de la protéine cible en mode lit expansé. Alternativement, si le flux est inversé, les particules adsorbées se déposeront rapidement et les protéines pourront être désorbées par un tampon d’élution. Le mode utilisé pour l'élution (lit expansé ou lit décanté) dépend des caractéristiques de l'alimentation. Après élution, l'adsorbant est nettoyé avec une solution de nettoyage en place (CIP) prédéfinie, le nettoyage étant suivi soit d'une régénération de la colonne (pour une utilisation ultérieure), soit d'un stockage.

Techniques spéciales

Chromatographie en phase inversée

La chromatographie en phase inversée (RPC) est toute procédure de chromatographie liquide dans laquelle la phase mobile est nettement plus polaire que la phase stationnaire. Elle est ainsi nommée car dans la chromatographie liquide en phase normale, la phase mobile est nettement moins polaire que la phase stationnaire. Les molécules hydrophobes de la phase mobile ont tendance à s'adsorber sur la phase stationnaire relativement hydrophobe. Les molécules hydrophiles de la phase mobile auront tendance à s’éluer en premier. Les colonnes de séparation comprennent généralement une chaîne carbonée C8 ou C18 liée à un substrat de particules de silice.

Chromatographie d'interaction hydrophobe

La chromatographie d'interaction hydrophobe (HIC) est une technique de purification et d'analyse qui sépare les analytes, tels que les protéines, sur la base des interactions hydrophobes entre cet analyte et la matrice chromatographique. Il peut fournir une approche orthogonale non dénaturante de la séparation de phase inversée, préservant les structures natives et potentiellement l'activité des protéines. Dans la chromatographie d'interaction hydrophobe, le matériau de la matrice est légèrement substitué par des groupes hydrophobes. Ces groupes peuvent aller des groupes méthyle, éthyle, propyle, butyle, octyle ou phényle. [29] À des concentrations élevées de sel, les chaînes latérales non polaires à la surface des protéines « interagissent » avec les groupes hydrophobes ; c'est-à-dire que les deux types de groupes sont exclus par le solvant polaire (les effets hydrophobes sont augmentés par l'augmentation de la force ionique). Ainsi, l'échantillon est appliqué sur la colonne dans un tampon hautement polaire, ce qui entraîne une association de taches hydrophobes sur l'analyte avec la phase stationnaire. L'éluant est généralement un tampon aqueux avec des concentrations de sel décroissantes, des concentrations croissantes de détergent (qui perturbe les interactions hydrophobes) ou des changements de pH. Le type de sel utilisé est d'une importance cruciale, les sels plus kosmotropes tels que définis par la série Hofmeister fournissant le plus de structuration de l'eau autour de la molécule et la pression hydrophobe qui en résulte. Le sulfate d'ammonium est fréquemment utilisé à cette fin. L'ajout de solvants organiques ou d'autres constituants moins polaires peut contribuer à améliorer la résolution.

En général, la chromatographie par interaction hydrophobe (HIC) est avantageuse si l'échantillon est sensible aux changements de pH ou aux solvants agressifs généralement utilisés dans d'autres types de chromatographie, mais pas à des concentrations de sel élevées. Généralement, c'est la quantité de sel dans le tampon qui varie. En 2012, Müller et Franzreb ont décrit les effets de la température sur l'HIC en utilisant de l'albumine sérique bovine (BSA) avec quatre types différents de résine hydrophobe. L'étude a modifié la température afin d'affecter l'affinité de liaison de la BSA sur la matrice. Il a été conclu que des températures cycliques de 50 à 10 degrés ne seraient pas adéquates pour éliminer efficacement toute la BSA de la matrice, mais pourraient être très efficaces si la colonne n'était utilisée que quelques fois. [30] L'utilisation de la température pour effectuer un changement permet aux laboratoires de réduire les coûts d'achat du sel et d'économiser de l'argent.

Si des concentrations élevées de sel ainsi que des fluctuations de température veulent être évitées, vous pouvez utiliser un produit plus hydrophobe pour rivaliser avec votre échantillon pour l'éluer. [source] Cette méthode dite indépendante du sel de HIC a montré un isolement direct de l'immunoglobuline humaine G (IgG) du sérum avec un rendement satisfaisant et a utilisé la bêta-cyclodextrine comme concurrent pour déplacer les IgG de la matrice. [31] Cela ouvre largement la possibilité d'utiliser HIC avec des échantillons sensibles au sel, car nous savons que des concentrations élevées de sel précipitent les protéines.

Chromatographie hydrodynamique

La chromatographie hydrodynamique (HDC) est dérivée du phénomène observé selon lequel les grosses gouttelettes se déplacent plus rapidement que les petites. [32] Dans une colonne, cela se produit parce que le centre de masse des plus grosses gouttelettes ne peut pas être aussi proche des côtés de la colonne que celui des plus petites gouttelettes en raison de leur taille globale plus grande. [33] Les gouttelettes les plus grosses s'éluent en premier à partir du milieu de la colonne tandis que les gouttelettes plus petites collent aux côtés de la colonne et s'éluent en dernier. Cette forme de chromatographie est utile pour séparer les analytes par masse molaire , taille, forme et structure lorsqu'elle est utilisée conjointement avec des détecteurs à diffusion de lumière , des viscosimètres et des réfractomètres . [34] Les deux principaux types de HDC sont les tubes ouverts et les colonnes remplies . Le tube ouvert offre des temps de séparation rapides pour les petites particules, tandis que la colonne HDC à garnissage peut augmenter la résolution et convient mieux aux particules dont la masse moléculaire moyenne est supérieure à celle des daltons . [35] L'HDC diffère des autres types de chromatographie car la séparation n'a lieu que dans le volume interstitiel, qui est le volume entourant et entre les particules dans une colonne remplie. [36]

La HDC partage le même ordre d'élution que la chromatographie d'exclusion stérique (SEC), mais les deux processus varient encore à bien des égards. [35] Dans une étude comparant les deux types de séparation, Isenberg, Brewer, Côté et Striegel utilisent les deux méthodes pour la caractérisation des polysaccharides et concluent que l'HDC couplée à la diffusion multiangle de la lumière (MALS) permet d'obtenir une distribution de masse molaire plus précise par rapport à l'off- ligne MALS que SEC en beaucoup moins de temps. [37] Cela est dû en grande partie au fait que la SEC est une technique plus destructrice en raison des pores de la colonne qui dégradent l'analyte pendant la séparation, ce qui a tendance à avoir un impact sur la distribution de masse. [37] Cependant, le principal inconvénient de l'HDC est la faible résolution des pics d'analytes, ce qui fait de la SEC une option plus viable lorsqu'elle est utilisée avec des produits chimiques qui ne sont pas facilement dégradables et où une élution rapide n'est pas importante. [38]

HDC joue un rôle particulièrement important dans le domaine de la microfluidique . Le premier appareil réussi pour le système HDC-on-a-chip a été proposé par Chmela et al. en 2002. [39] Leur conception a permis de réaliser des séparations à l'aide d'un canal de 80 mm de long sur une échelle de temps de 3 minutes pour des particules de diamètres allant de 26 à 110 nm, mais les auteurs ont exprimé la nécessité d'améliorer les paramètres de rétention et de dispersion . [39] Dans une publication de 2010 de Jellema, Markesteijn, Westerweel et Verpoorte, la mise en œuvre du HDC avec un flux bidirectionnel de recirculation a abouti à une séparation haute résolution basée sur la taille avec seulement un canal de 3 mm de long. [40] Avoir un canal aussi court et une résolution aussi élevée était considéré comme particulièrement impressionnant étant donné que les études précédentes utilisaient des canaux de 80 mm de longueur. [39] Pour une application biologique, en 2007, Huh, et al. a proposé un dispositif de tri microfluidique basé sur l'HDC et la gravité, utile pour empêcher les particules potentiellement dangereuses d'un diamètre supérieur à 6 microns de pénétrer dans la circulation sanguine lors de l'injection d' agents de contraste dans les ultrasons . [41] Cette étude a également fait des progrès en matière de durabilité environnementale dans la microfluidique en raison du manque d'électronique extérieure pilotant le flux, ce qui constituait un avantage de l'utilisation d'un dispositif basé sur la gravité.

Chromatographie bidimensionnelle GCxGC-TOFMS à la Faculté de Chimie du GUT Gdańsk , Pologne , 2016

Chromatographie bidimensionnelle

Dans certains cas, la sélectivité fournie par l’utilisation d’une seule colonne peut s’avérer insuffisante pour permettre la résolution des analytes dans des échantillons complexes. La chromatographie bidimensionnelle vise à augmenter la résolution de ces pics en utilisant une deuxième colonne aux propriétés physico-chimiques ( classification chimique ) différentes. [42] [43] Puisque le mécanisme de rétention sur ce nouveau support solide est différent de la première séparation dimensionnelle, il peut être possible de séparer par chromatographie bidimensionnelle des composés impossibles à distinguer par chromatographie unidimensionnelle. De plus, la séparation sur la deuxième dimension se produit plus rapidement que sur la première dimension. [42] Un exemple de séparation TLC bidimensionnelle est celui où l'échantillon est déposé sur un coin d'une plaque carrée, développé, séché à l'air, puis tourné à 90° et généralement redéveloppé dans un deuxième système de solvant. La chromatographie bidimensionnelle peut être appliquée aux séparations GC ou LC. [42] [43] Cette méthode de séparation peut également être utilisée dans une approche coupante, [44] où des régions d'intérêt spécifiques sur la première dimension sont sélectionnées pour être séparées par la deuxième dimension, ou dans une approche globale, [42] [43] où tous les analytes de la première dimension subissent la séparation de la deuxième dimension.

Chromatographie en lit mobile simulé

La technique du lit mobile simulé (SMB) est une variante de la chromatographie liquide haute performance ; il est utilisé pour séparer des particules et/ou des composés chimiques qui seraient difficiles, voire impossibles, à résoudre autrement. Cette séparation accrue est provoquée par un agencement de valve et de colonne qui est utilisé pour prolonger indéfiniment la phase stationnaire. Dans la technique à lit mobile de chromatographie préparative, l'entrée de l'alimentation et la récupération de l'analyte sont simultanées et continues, mais en raison de difficultés pratiques avec un lit en mouvement continu, une technique de lit mobile simulé a été proposée. Dans la technique du lit mobile simulé, au lieu de déplacer le lit, les positions d'entrée de l'échantillon et de sortie de l'analyte sont déplacées en continu, donnant l'impression d'un lit mobile. La véritable chromatographie sur lit mobile (TMBC) n’est qu’un concept théorique. Sa simulation, SMBC, est réalisée grâce à l'utilisation d'une multiplicité de colonnes en série et d'un agencement complexe de vannes, qui permet l'alimentation en échantillons et en solvants, ainsi que le prélèvement d'analytes et de déchets à des emplacements appropriés de n'importe quelle colonne, ce qui permet une commutation à intervalles réguliers. l'entrée de l'échantillon dans une direction, l'entrée du solvant dans la direction opposée, tout en modifiant également les positions de prélèvement de l'analyte et des déchets de manière appropriée.

Chromatographie en phase gazeuse de pyrolyse

La pyrolyse-chromatographie en phase gazeuse-spectrométrie de masse est une méthode d'analyse chimique dans laquelle l'échantillon est chauffé jusqu'à décomposition pour produire des molécules plus petites qui sont séparées par chromatographie en phase gazeuse et détectées par spectrométrie de masse.

La pyrolyse est la décomposition thermique de matériaux dans une atmosphère inerte ou sous vide. L'échantillon est mis en contact direct avec un fil de platine ou placé dans un tube à échantillon en quartz et chauffé rapidement à 600-1 000 °C. Selon l'application, des températures encore plus élevées sont utilisées. Trois techniques de chauffage différentes sont utilisées dans les pyrolyseurs actuels : four isotherme, chauffage inductif (filament Curie Point) et chauffage résistif utilisant des filaments de platine. Les grosses molécules se clivent à leurs points les plus faibles et produisent des fragments plus petits et plus volatils. Ces fragments peuvent être séparés par chromatographie en phase gazeuse. Les chromatogrammes de pyrolyse GC sont généralement complexes car une large gamme de produits de décomposition différents se forme. Les données peuvent être utilisées soit comme empreintes digitales pour prouver l'identité matérielle, soit les données GC/MS sont utilisées pour identifier des fragments individuels afin d'obtenir des informations structurelles. Pour augmenter la volatilité des fragments polaires, divers réactifs de méthylation peuvent être ajoutés à un échantillon avant la pyrolyse.

Outre l'utilisation de pyrolyseurs dédiés, la pyrolyse GC d'échantillons solides et liquides peut être réalisée directement à l'intérieur des injecteurs du vaporisateur à température programmable (PTV) qui assurent un chauffage rapide (jusqu'à 30 °C/s) et des températures maximales élevées de 600 à 650 °C. Ceci est suffisant pour certaines applications de pyrolyse. Le principal avantage est qu’aucun instrument dédié ne doit être acheté et que la pyrolyse peut être effectuée dans le cadre d’une analyse GC de routine. Dans ce cas, des revêtements d’entrée en quartz GC doivent être utilisés. Des données quantitatives peuvent être acquises et de bons résultats de dérivatisation à l'intérieur de l'injecteur PTV sont également publiés.

Chromatographie liquide rapide des protéines

La chromatographie liquide rapide des protéines (FPLC) est une forme de chromatographie liquide souvent utilisée pour analyser ou purifier des mélanges de protéines. Comme dans d'autres formes de chromatographie, la séparation est possible car les différents composants d'un mélange ont des affinités différentes pour deux matériaux, un fluide en mouvement (la « phase mobile ») et un solide poreux (la phase stationnaire). En FPLC, la phase mobile est une solution aqueuse, ou « tampon ». Le débit du tampon est contrôlé par une pompe volumétrique et est normalement maintenu constant, tandis que la composition du tampon peut varier en aspirant des fluides dans des proportions différentes à partir de deux ou plusieurs réservoirs externes. La phase stationnaire est une résine composée de billes, généralement d'agarose réticulé, emballées dans une colonne cylindrique en verre ou en plastique. Les résines FPLC sont disponibles dans une large gamme de tailles de billes et de ligands de surface en fonction de l'application.

Chromatographie à contre-courant

La chromatographie à contre-courant (CCC) est un type de chromatographie liquide-liquide, dans laquelle les phases stationnaires et mobiles sont des liquides et la phase liquide stationnaire est maintenue stagnante par une forte force centrifuge. [45]

Chromatographie hydrodynamique à contre-courant (CCC)

Le principe de fonctionnement de l'instrument CCC nécessite une colonne constituée d'un tube ouvert enroulé autour d'une bobine. La bobine tourne selon un mouvement giratoire à deux axes (cardioïde), ce qui provoque l'action d'un champ de gravité variable (G) sur la colonne à chaque rotation. Ce mouvement amène la colonne à voir une étape de partage par tour et les composants de l'échantillon se séparent dans la colonne en raison de leur coefficient de partage entre les deux phases liquides non miscibles utilisées. Il existe aujourd’hui de nombreux types de CCC. Il s'agit notamment du HSCCC (High Speed ​​CCC) et du HPCCC (High Performance CCC). HPCCC est la version la plus récente et la plus performante de l’instrumentation disponible actuellement.

Chromatographie de partage centrifuge (CPC)

Dans l'instrument CPC (chromatographie de partage centrifuge ou chromatographie hydrostatique à contre-courant), la colonne est constituée d'une série de cellules reliées entre elles par des conduits fixés à un rotor. Ce rotor tourne sur son axe central créant le champ centrifuge nécessaire au maintien en place de la phase stationnaire. Le processus de séparation dans le CPC est régi uniquement par la répartition des solutés entre les phases stationnaire et mobile, mécanisme qui peut être facilement décrit à l'aide des coefficients de partage ( K D ) des solutés. Les instruments CPC sont disponibles dans le commerce pour les séparations en laboratoire, à l'échelle pilote et industrielle avec différentes tailles de colonnes allant d'environ 10 millilitres à 10 litres de volume.

Chromatographie périodique à contre-courant

Contrairement à la chromatographie à contre-courant (voir ci-dessus), la chromatographie périodique à contre-courant (PCC) utilise une phase stationnaire solide et uniquement une phase mobile liquide. Elle s'apparente donc beaucoup plus à la chromatographie d'affinité conventionnelle qu'à la chromatographie à contre-courant. PCC utilise plusieurs colonnes qui, pendant la phase de chargement, sont connectées en ligne. Ce mode permet de surcharger la première colonne de cette série sans perdre de produit, qui traverse déjà la colonne avant que la résine ne soit complètement saturée. Le produit révolutionnaire est capturé dans la ou les colonnes suivantes. Dans une étape suivante, les colonnes sont déconnectées les unes des autres. La première colonne est lavée et éluée, tandis que la ou les autres colonnes sont encore en cours de chargement. Une fois la (initialement) première colonne rééquilibrée, elle est réintroduite dans le flux de chargement, mais en tant que dernière colonne. Le processus se poursuit ensuite de manière cyclique.

Chromatographie chirale

La chromatographie chirale implique la séparation des stéréoisomères. Dans le cas des énantiomères, ceux-ci ne présentent aucune différence chimique ou physique en dehors du fait qu’ils sont des images miroir tridimensionnelles. Pour permettre des séparations chirales, la phase mobile ou la phase stationnaire doivent elles-mêmes être rendues chirales, donnant des affinités différentes entre les analytes. Des colonnes HPLC de chromatographie chirale (avec une phase stationnaire chirale) en phase normale et inversée sont disponibles dans le commerce.

La chromatographie conventionnelle est incapable de séparer les mélanges racémiques d'énantiomères. Cependant, dans certains cas, des mélanges non racémiques d'énantiomères peuvent être séparés de manière inattendue par chromatographie liquide conventionnelle (par exemple HPLC sans phase mobile chirale ni phase stationnaire). [46] [47]

Chromatographie aqueuse en phase normale

La chromatographie aqueuse en phase normale (ANP) est caractérisée par le comportement d'élution du mode de phase normale classique (c'est-à-dire où la phase mobile est nettement moins polaire que la phase stationnaire) dans lequel l'eau est l'un des composants du système de solvant en phase mobile. Elle se distingue de la chromatographie liquide à interaction hydrophile (HILIC) en ce sens que le mécanisme de rétention est dû à l'adsorption plutôt qu'à la séparation. [48]

Applications

La chromatographie est utilisée dans de nombreux domaines, notamment l' industrie pharmaceutique , l' industrie agroalimentaire , l' industrie chimique , la médecine légale , l'analyse de l'environnement et les hôpitaux . [49]

Voir également

Les références

  1. ^ McMurry J (2011). Chimie organique : avec applications biologiques (2e éd.). Belmont, Californie : Brooks/Cole. pp. 395. ISBN 9780495391470.
  2. ^ González-González M, Mayolo-Deloisa K, Rito-Palomares M (1er janvier 2020), Matte A (éd.), "Chapitre 5 - Progrès récents de la chromatographie monolithique à base d'anticorps pour les applications thérapeutiques", Approches de la purification, Analyse et caractérisation des thérapies à base d'anticorps , Elsevier, pp. 105-116, doi : 10.1016/b978-0-08-103019-6.00005-9 , ISBN 978-0-08-103019-6, S2CID226450210 ​
  3. ^ Opérations alternatives de bioséparation : la vie au-delà de la chromatographie sur lit garni TM Przybycien, NS Pujar et LM Steele Curr Opin Biotechnol, 15 (5) (2004), pp. 469-478
  4. ^ Ongkudon CM, Kansil T, Wong C (2014). "Défis et stratégies dans la préparation d'adsorbants de chromatographie monolithique à base de polymères en grand volume". Journal de la science de la séparation . 37 (5) : 455-464. est ce que je :10.1002/jssc.201300995. ISSN1615-9314  . PMID  24376196.
  5. ^ González-González M, Mayolo-Deloisa K, Rito-Palomares M (1er janvier 2020), Matte A (éd.), "Chapitre 5 - Progrès récents de la chromatographie monolithique à base d'anticorps pour les applications thérapeutiques", Approches de la purification, Analyse et caractérisation des thérapies à base d'anticorps , Elsevier, pp. 105-116, doi : 10.1016/b978-0-08-103019-6.00005-9 , ISBN 978-0-08-103019-6, S2CID226450210 ​
  6. ^ Hostettmann K, Marston A, Hostettmann M (1998). Applications des techniques de chromatographie préparative dans l'isolement des produits naturels (deuxième éd.). Berlin, Heidelberg : Springer Berlin Heidelberg. p. 50.ISBN 9783662036310.
  7. ^ Harper D. "chromatographie". Dictionnaire d'étymologie en ligne .
  8. ^ Ettre LS, Zlatkis A, éd. (26 août 2011). 75 ans de chromatographie : un dialogue historique . Elsevier. ISBN 978-0-08-085817-3.
  9. ^ Ettre LS (mai 2003). "MS Tswett et l'invention de la chromatographie" (PDF) . LCGC Amérique du Nord . 21 (5) : 458-467.
  10. ^ Ettre LS, Sakodynskii KI (mars 1993). « MS Tswett et la découverte de la chromatographie II : Achèvement du développement de la chromatographie (1903-1910) ». Chromatographie . 35 (5-6) : 329-338. est ce que je :10.1007/BF02277520. S2CID97052560  .
  11. ^ "Le prix Nobel de chimie 1952". prixnobel.org . Récupéré le 25 août 2016 .
  12. ^ abcdBorman S (1987). "Éluant, effluent, éluat et éluite". Chimie analytique . 59 (2) : 99A. est ce que je :10.1021/ac00129a735.
  13. ^ Ettre LS (1993). "Nomenclature pour la chromatographie (Recommandations IUPAC 1993)". Chimie pure et appliquée . 65 (4) : 819-872. est ce que je : 10.1351/pac199365040819 .
  14. ^ Manish T. "Comment fonctionne la chromatographie sur colonne ?" BrightMags. Archivé de l'original le 21 avril 2017 . Récupéré le 7 avril 2017 .
  15. ^ Toujours WC, Kahn M, Mitra A (1978). "Technique chromatographique rapide pour les séparations préparatives avec une résolution modérée". J.Org. Chimique. 43 (14) : 2923-2925. CiteSeerX 10.1.1.476.6501 . est ce que je :10.1021/jo00408a041.  
  16. ^ Harwood LM, Moody CJ (1989). Chimie organique expérimentale : principes et pratique (édité illustré). WileyBlackwell. pp. 180-185. ISBN 978-0-632-02017-1.
  17. ^ Bourgeois S, Pfahl M (1976). "Répresseurs". Dans Anfinsen CB, Edsall JT, Richards FM (éd.). Progrès de la chimie des protéines . Vol. 30. Presse académique. p. 6–7. est ce que je :10.1016/S0065-3233(08)60478-7. ISBN 978-0-12-034230-3. PMID  779429.
  18. ^ Bernard F (2003). Manuel de chromatographie sur couche mince . Marcel Dekker Inc. ISBN 978-0824748661. OCLC437068122  .
  19. ^ Chromatographie par déplacement 101 Archivée le 15 septembre 2008 à la Wayback Machine . Sachem, Inc.Austin, Texas 78737
  20. ^ Rahman M, El-Aty A, Choi JH, Shin HC, Shin SC, Shim JH (novembre 2015). "Chapitre 3 Aperçu de base sur les colonnes de chromatographie en phase gazeuse". Science de la séparation analytique . John Wiley et fils. pp. 823-834. ISBN 9783527333745.
  21. ^ González-González M, Mayolo-Deloisa K, Rito-Palomares M (1er janvier 2020), Matte A (éd.), "Chapitre 5 - Progrès récents de la chromatographie monolithique à base d'anticorps pour les applications thérapeutiques", Approches de la purification, Analyse et caractérisation des thérapies à base d'anticorps , Elsevier, pp. 105-116, doi : 10.1016/b978-0-08-103019-6.00005-9 , ISBN 978-0-08-103019-6, S2CID226450210 ​
  22. ^ Wilchek M, Chaiken I (2000). "Un aperçu de la chromatographie d'affinité". Dans Bailon P, Ehrlich GK, Fung WJ, Berthold W (éd.). Chromatographie d'affinité . Méthodes en biologie moléculaire. Vol. 147. Presse Humana. p. 1 à 6. est ce que je :10.1007/978-1-60327-261-2_1. ISBN 978-1-60327-261-2. PMID  10857080.
  23. ^ Urh M, Simpson D, Zhao K (2009). "Chapitre 26 Chromatographie d'affinité". Guide de purification des protéines, 2e édition . Méthodes en enzymologie. Vol. 463. p. 417-438. est ce que je :10.1016/S0076-6879(09)63026-3. ISBN 9780123745361. PMID  19892186.
  24. ^ Markwell J (septembre 2009). "Approches fondamentales de laboratoire pour la biochimie et la biotechnologie, 2e édition". Enseignement de la biochimie et de la biologie moléculaire . 37 (5) : 317-318. est ce que je : 10.1002/bmb.20321 . ISSN1470-8175  .
  25. ^ Singh NK, DSouza RN, Bibi NS, Fernández-Lahore M (2015). "Capture directe de protéines marquées His6 à l'aide de cryogels mégaporeux développés pour la chromatographie d'affinité métal-ion". Dans Reichelt S (éd.). Chromatographie d'affinité . Méthodes en biologie moléculaire. Vol. 1286. p. 201-12. est ce que je :10.1007/978-1-4939-2447-9_16. ISBN 978-1-4939-2447-9. PMID  25749956.
  26. ^ Gaberc-Porekar V, Ménart V (octobre 2001). "Perspectives de chromatographie d'affinité sur métal immobilisé". Journal des méthodes biochimiques et biophysiques . 49 (1-3) : 335-60. est ce que je :10.1016/S0165-022X(01)00207-X. PMID  11694288.
  27. ^ Mahmoudi Gomari M, Saraygord-Afshari N, Farsimadan M, Rostami N, Aghamiri S, Farajollahi MM (décembre 2020). "Opportunités et défis des techniques de purification de protéines assistées par tag : applications dans l'industrie pharmaceutique". Avancées de la biotechnologie . 45 : 107653. est ce que je :10.1016/j.biotechadv.2020.107653. ISSN0734-9750  . PMID  33157154. S2CID  226276355.
  28. ^ Ninfa AJ (2009). Approches fondamentales de laboratoire pour la biochimie et la biotechnologie . ISBN 978-0-470-47131-9.
  29. ^ Ninfa AJ, Ballou DP, Benore M (2010). Approches fondamentales de laboratoire pour la biochimie et la biotechnologie . Hoboken, New Jersey : John Wiley.
  30. ^ Müller TK, Franzreb M (octobre 2012). "Adéquation des sorbants d'interaction hydrophobes commerciaux pour la chromatographie liquide de protéines à température contrôlée dans des conditions de faible teneur en sel". Journal de chromatographie A. 1260 : 88-96. est ce que je :10.1016/j.chroma.2012.08.052. PMID  22954746.
  31. ^ Ren J, Yao P, Chen J, Jia L (novembre 2014). "Chromatographie de déplacement hydrophobe indépendante du sel pour la purification des anticorps en utilisant la cyclodextrine comme déplaceur supermoléculaire". Journal de chromatographie A. 1369 : 98-104. est ce que je :10.1016/j.chroma.2014.10.009. PMID  25441076.
  32. ^ Chanson H, Tice JD, Ismagilov RF (février 2003). "Un système microfluidique pour contrôler les réseaux de réactions dans le temps". Angewandte Chemie . 42 (7) : 768-72. est ce que je :10.1002/anie.200390203. PMID  12596195.
  33. ^ Petit H, Langhorst MA (1er juillet 1982). "Chromatographie hydrodynamique". Chimie analytique . 54 (8) : 892A-898A. est ce que je :10.1021/ac00245a724. ISSN0003-2700  .
  34. ^ Brasseur AK, Striegel AM (avril 2011). "Caractérisation de la silice colloïdale en collier de perles par chromatographie hydrodynamique multidétecteur et comparaison à la chromatographie d'exclusion de taille multidétecteur, diffusion de lumière statique multiangle hors ligne et microscopie électronique à transmission". Chimie analytique . 83 (8) : 3068-75. est ce que je :10.1021/ac103314c. PMID  21428298.
  35. ^ ab Stegeman G, van Asten AC, Kraak JC, Poppe H, Tijssen R (1994). "Comparaison du pouvoir de résolution et du temps de séparation dans le fractionnement par champ thermique et flux, la chromatographie hydrodynamique et la chromatographie d'exclusion de taille". Chimie analytique . 66 (7) : 1147-1160. est ce que je :10.1021/ac00079a033. ISSN0003-2700  .
  36. ^ Petit H (1er juillet 1974). "Chromatographie hydrodynamique, une technique d'analyse granulométrique des particules colloïdales". Journal de la science des colloïdes et des interfaces . 48 (1) : 147-161. Code bibliographique :1974JCIS...48..147S. est ce que je :10.1016/0021-9797(74)90337-3. ISSN0021-9797  .
  37. ^ ab Isenberg SL, Brewer AK, Côté GL, Striegel AM (septembre 2010). "Caractérisation hydrodynamique par chromatographie d'exclusion de taille de l'alternan et comparaison avec le MALS hors ligne". Biomacromolécules . 11 (9) : 2505-11. est ce que je :10.1021/bm100687b. PMID  20690593.
  38. ^ Striegel AM, Brewer AK (19 juillet 2012). "Chromatographie hydrodynamique". Revue annuelle de chimie analytique . 5 (1) : 15-34. Code bibliographique :2012ARAC....5...15S. est ce que je :10.1146/annurev-anchem-062011-143107. PMID  22708902.
  39. ^ abc Chmela E, Tijssen R, Blom MT, Gardeniers HJ, van den Berg A (juillet 2002). "Un système de puce pour la séparation granulométrique des macromolécules et des particules par chromatographie hydrodynamique" (PDF) . Chimie analytique . 74 (14) : 3470-5. est ce que je :10.1021/ac0256078. PMID  12139056. S2CID  6948037.
  40. ^ Jellema LJ, Markesteijn AP, Westerweel J, Verpoorte E (mai 2010). "Chromatographie hydrodynamique accordable de microparticules localisées dans des microcanaux courts". Chimie analytique . 82 (10) : 4027-35. est ce que je :10.1021/ac902872d. PMID  20423105.
  41. ^ Huh D, Bahng JH, Ling Y, Wei HH, Kripfgans OD, Fowlkes JB et al. (février 2007). "Dispositif de tri de particules microfluidiques piloté par gravité avec amplification de séparation hydrodynamique". Chimie analytique . 79 (4) : 1369-1376. est ce que je :10.1021/ac061542n. PMC2527745 .PMID  17297936. 
  42. ^ abcd Prebihalo SE, Berrier KL, Freye CE, Bahaghighat HD, Moore NR, Pinkerton DK, Synovec RE (janvier 2018). "Chromatographie en phase gazeuse multidimensionnelle : progrès en matière d'instrumentation, de chimiométrie et d'applications". Chimie analytique . 90 (1) : 505-532. est ce que je :10.1021/acs.analchem.7b04226. PMID  29088543.
  43. ^ abc Stoll DR, Carr PW (janvier 2017). "Chromatographie liquide bidimensionnelle : un didacticiel de pointe". Chimie analytique . 89 (1) : 519-531. est ce que je :10.1021/acs.analchem.6b03506. PMID  27935671.
  44. ^ Tranchida PQ, Sciarrone D, Dugo P, Mondello L (février 2012). "Chromatographie en phase gazeuse multidimensionnelle déchirante : un examen de l'évolution récente, des applications et des perspectives d'avenir". Analytica Chimica Acta . Une sélection d'articles présentés lors du 12e Symposium international sur les technologies d'extraction (ExTech 2010). 716 : 66-75. Bibcode :2012AcAC..716...66T. est ce que je :10.1016/j.aca.2011.12.015. PMID  22284880.
  45. ^ Berthod A, Maryutina T, Spivakov B, Shpigun O, Sutherland IA (1er janvier 2009). "Chromatographie à contre-courant en chimie analytique (Rapport technique IUPAC)". Chimie pure et appliquée . 81 (2) : 355-387. est ce que je : 10.1351/PAC-REP-08-06-05 . ISSN1365-3075  .
  46. ^ Jürgen Martens, Bhushan, R. , Mieczysław Sajewicz, Teresa Kowalska J. Chromatogr. Sci. 2017 , Vol. 55, 748-749. ( est ce que je :10.1093/chromsci/bmx031)
  47. ^ Jürgen Martens, Ravi Bhushan, Helv. Chim. Actes 2014 , Vol. 97, 161-187. ( est ce que je :10.1002/hlca.201300392)
  48. ^ Kulsing C, Nolvachai Y, Marriott PJ, Boysen RI, Matyska MT, Pesek JJ, Hearn MT (février 2015). "Aperçu de l'origine de la sélectivité de séparation avec des adsorbants d'hydrure de silice". Le Journal de Chimie Physique B . 119 (7) : 3063-9. est ce que je :10.1021/jp5103753. PMID  25656442.
  49. ^ "Chromatographie : définition, fonctionnement et importance dans diverses industries" . www.researchdive.com . Récupéré le 25 février 2022 .

Liens externes

  • Nomenclature IUPAC pour la chromatographie
  • Programme Overlapping Peaks – Apprentissage par simulations
  • Vidéos de chromatographie – MIT OCW – Manuel de techniques de laboratoire numérique
  • Calculateurs d'équations de chromatographie – MicroSolv Technology Corporation
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Chromatography&oldid=1213725630"